一文读懂CAR-T细胞生产过程

一文读懂car-t细胞的生产过程

嵌合抗原受体（CAR）T细胞免疫疗法，是通过改造T细胞，使其发挥靶向特异性免疫的治疗方法。目前广泛应用于治疗血液肿瘤。

生产CAR-T细胞的主要步骤包括分离和富集T细胞、T细胞活化、慢病毒或电穿孔进行CAR基因转导、体外CAR-T细胞扩增以及制剂保存，整个制造周期一般需要2～3周。

l                      首先作为整个生产流程的第一步是通过血细胞分离机从病人血液中分离并富集单个核细胞，之后使用磁珠分离T细胞。接着使用激活剂刺激T细胞使其活化。在分离和纯化细胞的过程中，普遍采用封闭式和自动化系统。在大规模生产的过程中，可以有效缩短细胞处理时间并对整个过程进行跟踪。相比与开放工艺的手工操作，可以有效避免造成污染以及提高操作效率。

l                      在加入激活剂后，会短暂培养1-3天，使T细胞活化。之后便是将CAR基因转导到细胞内并实现表达。通常会使用慢病毒转导或电穿孔转导的方式，将CAR基因导入T细胞。这一步是整个生产过程的核心技术，如何实现较高的转效并具备稳定性，是需要从载体到转导方式以及转导工艺上投入大量时间的。

l                      完成转导后，细胞会转移至培养容器内培养1~2周，使细胞扩增至治疗所需的目标细胞量。由于个体差异和工艺条件的不同，患者细胞的体外扩增效果有很大的区别。通过使用自动化的生产设备或优化培养基，使细胞可以在短时间扩增至能够进行回输治疗的细胞量也是生产过程的关键。

l                      培养结束后，还需要使用合适的工艺进行细胞收获和分装冻存，使用封闭式的系统，在保证回收率的同时还需要保证制剂配方能与操作系统兼容。使用经过验证的冻存方法对于大规模生产至关重要，因为这会直接关系到最终回输给患者时的状态和数量。冻存环节需要稳健的工艺支持，避免细胞活性变差、细胞数量损耗、污染的发生。

l                      在生产过程中，还需要对产品质量进行控制，保证其安全性和均一性。安全性除了常规的内毒素、支原体及无菌外，如果采用病毒载体进行转导，还需保证病毒的高质量，避免存在RCR/RCL、低风险的整合特征等风险。CAR-T的均一性则要对不同的细胞表面标志物进行检测，包括CAR-T细胞中的非目标细胞成份和杂质并限定其比例，包括NK细胞等。以及用于鉴别CAR-T细胞中目标T细胞的比例。

浚行生物是一家以原代淋巴细胞、干细胞与类器官技术为核心的创新型生物科技企业。为满足日益增长的细胞治疗和生物药研发对于合规使用临床样本的需求，浚行建立起企业、医院、科研合作的桥梁，帮助客户完成临床批件申请，伦理过会，人遗咨询等流程。

1.                      临床实验立项申请

•根据《药物临床试验质量管理规范》要求发起申请和开展试验； 

•合作三级以上具有GCP资质的医院；

•严格遵守《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》进行志愿者招募和样品的管理使用， 

•第三方临床试验公司定期审核，确保记录真实可靠。

2.                      志愿者招募、筛选

•完整的健康记录包括性别、年龄、国籍、无重大疾病、无传染病、无近期用药、确保近期未参加其他临床试验等；

•知情同意书及上机采集记录一一对应；

•有HLA分型测序库数据；

•可根据客户要求进行回召。

3.                      细胞采集、分离

•专业的医疗级别采集设备，支持临床使用；

•专业的医生及护士团队，确保采集工作顺利开展；

•浚行独家“院内实验室”，确保下机后及时对细胞进行分离处理；

•生产团队博士领军，持续的研发能力，不断优化流程，提高细胞纯度和活性。

4.                      质控

•细胞活力>90%；

•冻存复苏活力质控；

•流式分型检测9色流式，多达十余种细胞亚型；

•常见传染病检测阴性，支原体检测阴性，细菌真菌检测阴性；

•完善的质量管理体系，通过ISO9001体系认证。

5.                      运输

•医疗级别冷链运输设备，全程温度记录可导出；

•专业的运输团队覆盖全国各大城市；

•部分省市支持“急速达”，确保8小时内急速运输。